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做实验 | 吉姆萨染色“助攻”凋亡细胞检测
发布时间:2019-02-19 | 浏览:399次 【关闭此页

       对于凋亡细胞的检测,皱缩、变形、空泡化,抑或裂解为凋亡小体,都逃不过光学倒置显微镜的火眼金睛。

       吉姆萨染色、瑞氏染色等两位“助攻”齐上阵,将凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状等典型形态一展无遗,以确保没有漏网之鱼。



       吉姆萨染色实验


       吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质。对细胞着色后便于观察,方便对凋亡细胞做出检测判断。


       PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质,因为蛋白质系两性电解质,带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境里正电荷增多,易和伊红结合,染色为偏红;在偏碱性环境里负电荷增多,易和美蓝或天青结合,染色偏蓝。

<东澳生物实验室实拍图,盗图必究!>


       实验步骤


       1.将显影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盘中。

       (1)1个盘:pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液,所配的25倍稀释的吉姆萨染液。

       (2)3个盘:水。

       (3)脱水系列溶液:

        ①3个盘:分别盛50%、70%和95%乙醇。

        ②2个盘:盛有100%乙醇。

        ③3个盘:盛有二甲苯。

       2.在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s(依染色时间决定染色的强弱),将玻片在水中浸泡3次,每次2 min。

       3.连续用乙醇脱水系列溶液处理,每盘中浸泡2 min,将玻片移至二甲苯盘中,毎次浸泡2 min,共3次。

       4.在通风橱中,按如下操作压片固定:用一平头镊(拿在左手),从二甲苯中取出一块玻片,夹住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所处位置),左手拿一干净的盖玻片,很缓慢地放在载玻片上(在加压片固定介质和盖玻片前,勿使玻片变干,因微小气泡会造成人为假象)。

       5.用3MM 滤纸,沿盖玻片边缘,小心吸去多余固片介质/二甲苯,并擦拭载玻片背面(勿擦拭盖玻片)。

       6.将玻片平放于一硬纸盒盘上,置42℃温孵箱2天使之凝固。

       7.以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳,染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒,必要时,载玻片上再注明标签。

       8.显微镜观察玻片,观察时可依信号强弱,调节光亮。


<东澳生物实验室实拍图,盗图必究!>


       注意事项


       ▲1.勿将玻片直立存放于玻片中,因此时固片介质尚未凝结。

       ▲2.细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片一定清洁,要无酸碱污染。

       ▲3.配制顼特液一定用优质甲醇,稀释染色一定用缓冲液,冲洗一定用水应近中性,不然可导致各种细胞染色反应异常,以致于识别困难,甚至造成错误的。

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